近日，中國熱科院生物所蛋白質(zhì)組學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在高濃度瓊脂糖凝膠制備及應(yīng)用方面取得新進(jìn)展，開發(fā)出一種分離低分子量核酸和蛋白質(zhì)的高濃度瓊脂糖凝膠制備和電泳方法。通過該方法可制備濃度高達(dá)14%的瓊脂糖凝膠，分離相差2-bp或2-nt的DNA片段和實(shí)現(xiàn)植物復(fù)雜蛋白質(zhì)的高分辨率分離。
核酸和蛋白質(zhì)的凝膠分離一直是分子生物學(xué)研究的重要組成，但低/中濃度瓊脂糖凝膠電泳對于低分子量核酸和蛋白質(zhì)的分離達(dá)不到聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）的高分辨率。針對這一難題，本研究團(tuán)隊(duì)利用高溫高壓制備了充分溶解的高濃度瓊脂糖凝膠（HAG），發(fā)明了一種簡單易操作的灌膠塑料盒灌制黏稠的HAG垂直凝膠，并改進(jìn)了適合小分子量核酸和蛋白高濃度瓊脂糖電泳（HAGE）的緩沖液條件，可有效分離在10-100 bp范圍內(nèi)相差2-bp或2-nt的DNA片段，在10-200 kDa范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)植物復(fù)雜蛋白質(zhì)的高分辨率分離。HAGE不僅達(dá)到了媲美PAGE的小分子量核酸蛋白分離效果，而且制備過程中也不涉及危險化學(xué)試劑；更為關(guān)鍵的是HAGE可以應(yīng)用于一些PAGE較難應(yīng)用的研究，如In-Gel Western blot和蛋白凝膠回收。該方法的建立為植物蛋白質(zhì)分離鑒定等研究提供了技術(shù)支撐。
該研究成果以“A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins”為題發(fā)表于《International Journal of Biological Macromolecules》。中國熱科院生物所副研究員常麗麗為論文第一作者，中國熱科院生物所副研究員仝征、?？趯?shí)驗(yàn)站研究員徐兵強(qiáng)為論文通訊作者。該研究得到了國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、海南省自然科學(xué)基金、中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)等項(xiàng)目資助。
該團(tuán)隊(duì)自組建以來，已構(gòu)建穩(wěn)定的熱帶作物蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)體系，并利用比較蛋白質(zhì)組學(xué)、磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)、高通量蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)重點(diǎn)圍繞天然橡膠生物合成、木薯塊根淀粉積累、香蕉枯萎病致病機(jī)理等開展研究，獲得較好的研究進(jìn)展，已發(fā)表學(xué)術(shù)論文49篇，其中在《Molecular&Cellular Proteomics》《Journal of Proteome Research》等期刊發(fā)表SCI論文30篇；獲授權(quán)國家發(fā)明專利6件，海南省科技進(jìn)步二等獎1項(xiàng)。
論文鏈接（點(diǎn)擊閱讀原文查看）：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358
2023年2月14日
來源：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院
來源：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院
